Unfortunately, this page is not available in English. This is the Russian version.

Инструкция к набору для выделения ДНК из агарозного геля

Данный набор предназначен для быстрого выделения ДНК из агарозного геля или очистки ДНК после ферментативной реакции (70-10000 bp, до 10 мкг). Очищенная ДНК пригодна для любых молекулярно-биологических работ.

Состав набора (50 выделений):

Компонент набора Количество
Колонки с сорбентом 50 шт
Пробирки для сбора проскока 50 шт
Solubilizing solution 1 × 50 мл
Washing solution with GuHCl 1 × 30 мл
Washing solution with ethanol, concentrate 2 × 10 мл
Кислый буфер 1 × 1 мл
Elution buffer 1 × 5 мл

Хранить при комнатной температуре, срок хранения 1 год.

Перед началом работы

Добавьте 40 мл 96% этанола к 10 мл концентрата промывочного раствора, поставьте отметку на крышке.

При образовании преципитата в Solubilizing solution нагрейте его не более чем до 50С до полного растворения осадка.

Весь протокол выполняется при комнатной температуре, все центрифугирования при 10000-13000 об/мин.

Для очистки ДНК после ферментативных реакций просто добавьте 3 объема буфера Solubilization solution и перемешайте и переходите к шагу 4.

Протокол выделения ДНК из агарозного геля

  1. Вырезать кусочек геля с ДНК, поместить в 1,5 мл пробирку, взвесить.
  2. Добавить 4 объема Solubilization.
    Примечание: если кусочки геля получились разного веса, удобно работать ориентируясь на наиболее тяжелый кусочек, т. е. во все пробирки добавляются одинаковые объемы, рассчитанные по максимальному весу.
  3. Инкубировать при 50°С 10 мин периодически перемешивая, к концу инкубации кусочек геля должен полностью раствориться. При выделении из геля с содержанием агарозы более 2% возможно будет необходимо увеличить время инкубации. Внимание: раствор после инкубации должен оставаться желтым. Если раствор стал фиолетовым, следует добавить 5 мкл кислого буфера и перемешать, при этом раствор должен стать желтым.
  4. Добавьте 1 объем (по гелю или исходному объему раствора) изопропанола, перемешайте.
  5. Раствор нанесите на колонку, помещенную в 2 мл пробирку для сбора проскока.
  6. Центрифугировать 30 сек, 10000 - 13000 об/мин. Проскок с колонки вылить.
  7. Нанести на колонку 500 мкл буфера Washing solution with GuHCl, центрифугировать 30 сек, 10000 - 13000 об/мин. Проскок с колонки вылить.
  8. Нанести на колонку 500 мкл промывочного раствора с этанолом, центрифугировать 30 сек, 10000 - 13000 об/мин. Проскок с колонки вылить. Повторить.
  9. После удаления проскока поместить пустые колонки в центрифугу и центрифугировать 1 мин, 10000-13000 об/мин.
  10. Колонки поместить в новые пробирки 1,5 мл, нанести в центр фильтра колонки 10-50 мкл элюирующего буфера, инкубировать 1 мин при комнатной температуре. Центрифугировать 1 мин, 10000- 13000 об/мин.
  11. При измерении концентрации ДНК разводить только в ТЕ pH 8,5 или элюирующем буфере иначе вы получите неверные значения концентрации и A260/280. Для контроля выделения фрагмента с помощью агарозного гель-электрофореза рекомендуется окрашивание геля реагентом DsGreen, так как его чувствительность на порядок превышает чувствительность EtBr, и вы можете нанести на гель совсем небольшое количество выделенного фрагмента (0.5-1 нг).
Your item has been added. View your cart or proceed to checkout
The count of items is incorrect.